懸浮細胞的MTT實驗操作步驟及注意事項

操作步驟：

1. 將懸浮細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，用PBS洗滌細胞，離心300g，5分鐘。去除上清液，重新懸浮細胞至適當濃度（如1×10^5）

2. 接種細胞：用含10%細胞完全培養(yǎng)配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。

3. 培養(yǎng)細胞：在37℃、5%CO2的條件下孵育16-48小時，然后在倒置顯微鏡下觀察。

4. 呈色：取出96孔板，將每孔上清液抽出。每孔加入100ul的預(yù)先稀釋好的MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），使細胞與mtt試劑充分接觸后，繼續(xù)培養(yǎng)4小時,使細胞代謝mtt，形成紫色結(jié)晶物;

5. 溶解結(jié)晶物：對于懸浮細胞，推薦跳過某些步驟并直接進行離心（1000轉(zhuǎn)x10分鐘），然后小心吸掉上清液。接著，每孔加入100ul的二甲基亞砜（DMSO），置搖床上低速振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。

6. 比色：在酶聯(lián)免疫檢查儀上，選擇OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值。

Thp-1 cells Line（啟達生物，catlog：CD0122)

K-562 cells Line（啟達生物 catlog：CD0115)

注意事項：

6. 實驗環(huán)境：確保實驗在無菌、無塵、恒溫（37℃）和恒濕的環(huán)境中進行，以維持細胞的最佳生長條件。

7. 溶解結(jié)晶物時應(yīng)充分振蕩，以確保完全溶解。

8.  細胞計數(shù)：在接種細胞時，確保準確計數(shù)，因為細胞數(shù)量直接影響實驗結(jié)果。

9. MTT溶液：MTT溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長時間儲存導(dǎo)致活性降低。

10.  避免交叉污染：在操作過程中，注意更換吸頭和管尖，避免不同孔之間的交叉污染。

11.  離心條件：在離心過程中，確保轉(zhuǎn)速和時間設(shè)置正確，避免對細胞造成損傷。

12. DMSO操作：DMSO具有一定的毒性，操作時需佩戴防護眼鏡和手套，確保安全。

8. 結(jié)果解讀：OD值的變化反映了細胞的活性，但需注意排除其他可能干擾因素，如培養(yǎng)基的顏色、氣泡等。

9. 實驗記錄：詳細記錄實驗過程中的所有操作和環(huán)境條件，以便后續(xù)分析和復(fù)查。

以上步驟和注意事項完成后，可以確保實驗的準確性和可靠性，從而得到準確的細胞活性數(shù)據(jù)。