一．RAW264.7細胞背景介紹

細胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織，是科研上最常用的炎癥細胞模型之一。該細胞易于增殖，有高效DNA轉(zhuǎn)染力，對RNA干擾敏感，常用作轉(zhuǎn)染宿主細胞和復制小鼠諾如病毒。細胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原陰性。據(jù)報道，該細胞建系后已不分泌且檢測不到病毒顆粒，XC斑點形成實驗陰性?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞，LPS或PPD處理2天后可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

二．RAW264.7細胞形態(tài)特征

1、RAW264.7細胞一般為圓形或橢圓形，細胞核為圓形或橢圓形，染色較深。貼壁特別牢固。若細胞呈多角形時，細胞為激活狀態(tài)。

2、RAW264.7具有吞噬能力，當細胞吞噬抗原后，細胞會釋放趨化因子，進一步促進細胞伸出偽足，增強粘附攀爬能力。若細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣，細胞剛傳完代比較稀疏的時候，都會讓該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形，鏡下會看到具有細長偽足的小細胞被類似上皮的梭形細胞。

3、這個細胞屬于慢熱型的，很難消化，消化時間不夠則導致細胞無法消化下來，消化時間太長，傳代之后就會長個角給你看看，使勁吹打和細胞刀刮下來，則傳代之后不只是長個角給您看看了，還會飄起很多小黑點，而且這種細胞傳代時接種密度要大，否則也容易使巨噬細胞分化，細胞變形，并且不能恢復，這是培養(yǎng)這種細胞時最需要注意的問題。

4、RAW264.7細胞生長時喜歡結(jié)伴。正常生長狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片的生長，片片之間不連接，等到長到更多更密的時候會連成大片，并疊加成層。疊加成層的細胞需要更多的營養(yǎng)，一旦營養(yǎng)跟不上，細胞也會長個角給你瞅瞅，所以需要在細胞疊加的時候進行操作。

5、RAW264.7細胞傳代后貼壁迅速，半小時就能貼上一大片，剛貼壁是細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。若這個時候覺得活化的細胞較多，即長梭形的細胞較多時，可在細胞傳代消化重新貼壁半小時后進行換液，只保留生長狀況較好的細胞。

6、RAW264.7細胞的生長對血清要求比較高，血清不好會導致細胞生長情況變差。這是一個大胃王，所以在看到培養(yǎng)基變黃的時候不要遲疑，立馬換液處理。

三、培養(yǎng)中的注意事項及傳代步驟

1、培養(yǎng)之前，一切與細胞接觸的玻璃器皿和器具都要進行熱源處理。（200-250℃烘烤4-6h）

我們的消化及傳代方法：

方法一、消化液：0.5%胰酶、0.2EDTA，實驗前加溫到37℃以T25培養(yǎng)瓶為例：

1、細胞貼壁生長，長滿瓶底的95%時，棄去培養(yǎng)液，加D-HANKS漂洗兩次； 

2、加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，消化37℃約2-5min，鏡下可看見細胞基本脫落即終止消化，收集消化后的細胞；（因為底層的細胞一般長有偽足，它緊緊的貼在瓶壁上，更難消化，消化時可先收集上層細胞，然后再消化底層細胞，每次消化下來的細胞不能放再同一瓶里）。

3、加入D-HANKS漂洗兩次，加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，37℃消化約2-5min，繼續(xù)消化底層的細胞，鏡下可看見細胞基本脫落即終止消化，單獨收集消化后的細胞；

4、加入新培養(yǎng)液10Ml輕輕彈散混懸細胞，按需要分入新的培養(yǎng)瓶中，37℃CO2培養(yǎng)箱，幾小時后即可貼壁。

四、凍存的注意事項：

1、RAW264.7的凍存過程應(yīng)盡量減少熱源對細胞的影響，這樣對細胞種子的潔凈度有更好的保障。

2、這種細胞對空間狀態(tài)很敏感，所以復蘇的細胞密度或復蘇細胞數(shù)量控制在10^4-10^5為宜，這種接種密度接種在75cm2培養(yǎng)瓶中養(yǎng)2天后細胞密度即可到達70-80%，若細胞在復蘇的時候有偽足，先讓細胞生長到堆疊起來，然后再進行傳代，底部細胞棄掉，盡量選擇好的血清培養(yǎng)，可讓新生細胞慢慢達到未激活狀態(tài)。