目前細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類：化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是通用并且準(zhǔn)確無誤的，所以只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求或者實(shí)驗(yàn)探索選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)然也可以在前輩們發(fā)的文獻(xiàn)中多看看，前車之鑒可以減少很多不必要的花費(fèi)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染低都是PCR試劑的問題嗎？PCR純度不夠確實(shí)會(huì)有這樣的問題，所以選擇PCR試劑很重要 主要還是以下幾點(diǎn)影響：

1. 其他微生物污染

您覺得您養(yǎng)的細(xì)胞 ，不，不，不 ，可能您只知道您養(yǎng)的是細(xì)胞，你不知道的是您的細(xì)胞可能背著您養(yǎng)了一群小三，比如支原體，病毒，黑膠蟲等等，特別是支原體它可以更改細(xì)胞的特性，穿透細(xì)胞膜進(jìn)行基因改造，培養(yǎng)幾代可能看不到“它”給細(xì)胞做的整容效果，但是隨著代次的增多，細(xì)胞就慢慢體現(xiàn)出來了，“它”已經(jīng)變得不是從前的那個(gè)“它”了，所以建議在轉(zhuǎn)染之前進(jìn)行一次支原體檢測，如有支原體清除干凈再轉(zhuǎn)染。

2.交叉污染：

如果同時(shí)養(yǎng)了很多細(xì)胞，在操作的時(shí)候沒有規(guī)范化，然后不小心讓A細(xì)胞到B細(xì)胞家里走了個(gè)親戚，最后的結(jié)果可能就是A細(xì)胞和B細(xì)胞不離不棄，若B細(xì)胞比較強(qiáng)悍，可能會(huì)發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時(shí)候一定要注意，發(fā)生不明確的交叉污染，寧可錯(cuò)殺一千，不要放過一個(gè)。

3.轉(zhuǎn)染高不高，時(shí)機(jī)很重要

轉(zhuǎn)染細(xì)胞真的沒有那么容易 ，想什么時(shí)候都可以，就像不尿急，占個(gè)廁所也拉不出來，相比非分裂的細(xì)胞—正在分裂的細(xì)胞往往會(huì)比靜止細(xì)胞更容易攝取并表達(dá)外源DNA，因此對大多數(shù)操作而言，細(xì)胞一般建議在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或者前一天種板，需要注意的是，鋪板細(xì)胞不宜過多，特別是瘋長的癌細(xì)胞，因?yàn)槿绻?xì)胞較多，甚至互相疊加，細(xì)胞自己都吃不飽，住不好，它也糟心的很，哪有時(shí)間和您玩轉(zhuǎn)染？

4. 抗生素和血清帶偏的轉(zhuǎn)染效果

本來想 ，能讓個(gè)細(xì)胞好好生長不容易 ，為了防治心里覺得細(xì)胞可能產(chǎn)生的各種污染 ，于是給他們加上各種抗生素預(yù)防，比如青霉素和鏈霉素，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時(shí)候，若含有這兩個(gè)組分，可增加細(xì)胞的通透性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染過低或者細(xì)胞全死亡，所以細(xì)胞它是不會(huì)說話 ，要是會(huì)說話，肯定要罵我們了 ，好好的一直給他們吃各種的藥。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在的情況下效率會(huì)很低，因此轉(zhuǎn)染前要去除血清。Cell systems原代細(xì)胞采用無抗體洗滌離心分選，可以讓細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更為精確，使用他們的細(xì)胞發(fā)表的文獻(xiàn)影響因子在10分以上。

另外DNA不純，攜親戚上陣或內(nèi)毒素超標(biāo)，都會(huì)引起轉(zhuǎn)染效果偏低或者細(xì)胞死亡現(xiàn)象的發(fā)生，選擇品牌試劑很重要。

HighQu PCR試劑部分參考文獻(xiàn)：

1.Disarrangement of Endoplasmic reticulummitochondria communication impairs Ca2+ homeostasis in FRDA bioRxiv, 2020 LR Rodríguez, P CalapQuintana qPCR with ORA qPCR Green ROX L Mix (HighQu, Kralchtal, Germany) on a CFX connectTM Real-Time PCR Detection System (Bio-rad）

2. . Disruption of neural crest enhancer landscapes as an etiological mechanism for human neurocristopathies 2019, kups.ub.unikoeln.de M Bartusel Real-time quantitative PCR was performed on the Light Cycler 480 II (Roche) with the ORA qPCR Green ROX L Mix (HighQu).

3. A combined computational pipeline to detect circular RNAs in human cancer cells under hypoxic stress ournal of molecular …, 2019 A Di Liddo RT-qPCR using 2X ORA qPCR Green ROX L Mix (highQu GmbH), …in a PikoReal 96 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)