細(xì)胞間總是有很多奇特的事情發(fā)生，比如說同一個(gè)培養(yǎng)箱里的細(xì)胞，為什么別人的好好的，我的卻一直有問題，不是污染就是死亡，要么就是停滯不長，人家三天換液一次，照樣傳代凍存實(shí)驗(yàn)，我三天換液也不行，每天換液也不行，水逆期該如何對(duì)付？

   這是一個(gè)復(fù)蘇第二天的細(xì)胞，感覺真的是找不到問題，一直覺得水逆期過去了，光明終于來了，開開心心的換了個(gè)液，準(zhǔn)備第二天傳代。。。

   但是24小時(shí)之后再觀察細(xì)胞狀態(tài)，就變成下面的樣子了，所有貼壁細(xì)胞都聚團(tuán)漂浮起來，而且背景下還有很多細(xì)小的砂礫狀黑色顆粒，PBS怎么洗也洗不掉，很明顯這個(gè)細(xì)胞也泡湯了。

   如果細(xì)胞被細(xì)菌污染了，培養(yǎng)皿或瓶中的細(xì)胞狀態(tài)很快就會(huì)發(fā)生變化，表現(xiàn)為胞漿中出現(xiàn)大量的顆粒，液體渾濁、培養(yǎng)基PH下降，變成黃色，貼壁細(xì)胞形態(tài)變圓、會(huì)脫壁死亡；而受到真菌污染的細(xì)胞，細(xì)胞狀態(tài)并不會(huì)馬上發(fā)生變化，培養(yǎng)3-4天后，你可能才會(huì)在培養(yǎng)皿中看到白色的漂浮物或者黑色的小點(diǎn)兒，只有兩種可能性，一種就是細(xì)胞污染，另一種培養(yǎng)箱內(nèi)部溫度不均衡，需要放個(gè)其他的細(xì)胞到那個(gè)位置測(cè)試一下。

   但很奇怪的是，實(shí)驗(yàn)室里養(yǎng)這個(gè)細(xì)胞的并不是只有一個(gè)人，其他人的細(xì)胞無論是一樣的或者別的細(xì)胞都挺好的，只有這個(gè)同學(xué)復(fù)蘇，傳代亦或是從別人那里剛借來的細(xì)胞都死翹翹了，搞得她一個(gè)月不敢養(yǎng)任何細(xì)胞，也導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的人都在幫她找污染的原因。

開啟污染大排除

   首先，我們使用的都是同一種血清、雙抗和培養(yǎng)基，如果是上述哪一種出現(xiàn)問題，那么應(yīng)該是所有的人細(xì)胞都出問題了才對(duì)，排除試劑問題。

其次，她每次使用前都會(huì)把需要使用的耗材放在超凈臺(tái)中紫外照射30分鐘以上，所以也不會(huì)是使用耗材造成的污染，排除耗材問題

   最后我們把目光集中到了細(xì)胞間水浴鍋和服裝穿戴上。因?yàn)樽罱诉@個(gè)倒霉的同學(xué)以外，其他人都沒有復(fù)蘇細(xì)胞。而這同學(xué)為了方便，將水浴鍋搬到了緩沖間的自來水龍頭下，水浴箱里的水就是水龍頭里的自來水，里面竟然還飄著只死蚊子…..而這位同學(xué)自從進(jìn)了細(xì)胞間以后，大耳環(huán)手鐲就沒有離身過，白大褂也沒有洗，袖口都黑的發(fā)亮了，即使細(xì)胞間的白大衣常年被紫外照著，可能也依然逃不掉有污染的痕跡。。。

   所以，在這樣的日常操作下，細(xì)胞不死都怪了。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，無論是配制試劑還是水浴鍋中用于細(xì)胞復(fù)蘇的水，都需要使用超純水；并且，即使凍存管是使用封口膜封存的，也要在超純水中復(fù)蘇才可以。

   與此同時(shí)，人員流動(dòng)也是細(xì)胞間無法控制的污染原因之一。人員流動(dòng)本身就會(huì)攜帶很多灰塵，而細(xì)菌就會(huì)附集在灰塵之中，細(xì)胞間的無菌服除了需要定期清洗更換外，在穿著上也有要求。勤洗澡，勤換衣，女生盡量少帶首飾為好。

細(xì)胞培養(yǎng)遇到污染處理的辦法

   如果是細(xì)菌污染，還沒有大爆發(fā)，污染較小，可以把我們的G/A和PS分別加入培養(yǎng)液中，以100ml培養(yǎng)基為例：加入G/A 0.75ml,加入PS:0.5ml ，24小時(shí)后換液。連續(xù)殺兩天后，細(xì)胞黑點(diǎn)減少，再使用回來正常的抗生素濃度。

   有時(shí)候培養(yǎng)的一些細(xì)胞株鏡下可見細(xì)胞質(zhì)中有多個(gè)空泡，有人說，細(xì)胞不一樣所以看到的形態(tài)和特征也不一樣，比如說內(nèi)皮細(xì)胞是一種“很臟”的細(xì)胞，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)過程中細(xì)胞之間的擠壓和疊加，視覺下會(huì)看到很多圓形結(jié)構(gòu)。這種情況不一樣，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中出現(xiàn)很多空泡，這是很明顯的異常顯現(xiàn)，但即便如此培養(yǎng)基的顏色并沒有發(fā)生變化，細(xì)胞仍在繼續(xù)分裂生長，只是形態(tài)發(fā)生變化拉長而已。

   這種情況基本上可以判定是支原體污染了。細(xì)胞受到支原體污染后比真菌污染更難發(fā)現(xiàn)。最開始的階段，細(xì)胞不會(huì)發(fā)生任何變化，培養(yǎng)基的顏色和細(xì)胞狀態(tài)都不會(huì)有任何差別。當(dāng)你傳代幾次之后，你會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長速度緩慢，形態(tài)開始老化。如果不仔細(xì)觀察細(xì)胞內(nèi)部的變化，我們很容易將其歸結(jié)于由于個(gè)人處理不當(dāng)導(dǎo)致的細(xì)胞老化。這也提醒我們一點(diǎn)，日常觀察細(xì)胞狀態(tài)如何，不只是看有沒有細(xì)胞死亡這么簡單。

   支原體污染后的細(xì)胞，高倍鏡下可見細(xì)胞核或胞漿內(nèi)會(huì)出現(xiàn)大小不等的空泡，細(xì)胞經(jīng)常表現(xiàn)出一種突然暴斃的狀況，而我們也很難找到具體是在哪一階段感染了支原體。所以即使在這期間凍存細(xì)胞，再次復(fù)蘇后，仍會(huì)有支原體污染的情況存在，支原體污染影響的不僅是細(xì)胞形態(tài)和生長速度，也會(huì)改變細(xì)胞的自身的特性，誘導(dǎo)染色體發(fā)生改變，所以即使細(xì)胞沒有死，也一樣會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

   支原體污染推薦使用支原體清除劑（啟達(dá)生物,貨號(hào)：SD0033）采用小分子抗生素和廣譜抗生素結(jié)合配制，可清除99%以上的不同的支原體污染，支原體和細(xì)菌或真菌污染還有所不同，一旦發(fā)現(xiàn)支原體污染，很可能是一個(gè)孵箱或一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的整體問題，而不是個(gè)人情況。所以為了預(yù)防支原體污染和擴(kuò)散，最好的辦法就是一經(jīng)發(fā)現(xiàn)馬上把發(fā)現(xiàn)的有的細(xì)胞隔離起來并清理消毒培養(yǎng)箱及細(xì)胞間。

    還有就是黑膠蟲污染，和發(fā)現(xiàn)支原體污染一樣，需要迅速對(duì)實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞培養(yǎng)房進(jìn)行消毒，后，珍貴細(xì)胞隔離培養(yǎng)采用黑膠蟲抑制劑(啟達(dá)生物,貨號(hào)：SD0036)清除。

   除了上述說的三種問題，還有一種是細(xì)胞間的不可抗力—有些人某一時(shí)間段養(yǎng)什么細(xì)胞都會(huì)死，排查了所有可疑點(diǎn)，都找不到污染原因。如果真的遇到這樣的情況，可能這是真的水逆期到了，建議給自己安排點(diǎn)其他的事情做做，做完后再來養(yǎng)細(xì)胞，可能就沒有問題了。