CCK8主要應(yīng)用于細胞活力增殖和毒性檢測，購買此試劑盒需自備96孔板，10 u、100-200 ul以及多通道移液器，帶有450 nm濾光片的酶標儀，CO2培養(yǎng)箱。

試劑規(guī)格：1ml/100T，5ml/500T，10ml/1000T

細胞活性檢測

1. 在96孔板中接種細胞懸液(100 /)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37C，5% CO2的條件下)。

2. 向每孔加入10u的CCK- 8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

4. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

5. 如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 ul01 M HCI溶液或者1% w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

細胞增殖-毒性檢測

1.在96板中配制100的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37C，5% CO的條件下)2.向培養(yǎng)板加入10 l不同濃度的待測物質(zhì)。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:612,24或48小時)。

4.向每孔加入10  CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。

5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

6.用酶標儀測定在450 nm處的吸光度

7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 ul 0.1 M HCI溶液者1% w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。注意:如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

制作標準曲線

1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2按比例(例如:1/2比例) 依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔

3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標 (X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸) 的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)

聲明：產(chǎn)品僅科研使用。