G418是一種氨基糖苷類抗生素，常用于分子遺傳試驗(yàn)中作為抗性篩選試劑。其篩選濃度取決于所使用的細(xì)胞類型，例如：

• 篩選哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，推薦起始篩選濃度為400微克/毫升。?

• 篩選植物細(xì)胞時(shí)，推薦起始篩選濃度為10微克/毫升。

• 篩選酵母細(xì)胞時(shí)，推薦起始篩選濃度為500微克/毫升。

確定最佳篩選濃度通常通過殺滅曲線（kill curve）來確定，即通過逐步增加G418的濃度，觀察細(xì)胞死亡的情況，找到能夠殺死所有細(xì)胞的最小G418濃度。例如，在篩選CHO細(xì)胞時(shí)，推薦的G418濃度范圍為200-2000μg/ml。?

在實(shí)際操作中，可能需要通過實(shí)驗(yàn)來確定具體的最佳篩選濃度，因?yàn)椴煌?xì)胞類型和生長(zhǎng)條件下，G418的用量可能會(huì)有所不同。例如，在篩選CHO細(xì)胞時(shí)，推薦的G418濃度范圍為200-2000μg/ml，而篩選植物和酵母細(xì)胞的推薦濃度分別為10-100μg/ml和500-1000μg/ml。

1.制備篩選培養(yǎng)基：確定G418的最佳篩選濃度需要考慮細(xì)胞類型、生長(zhǎng)條件以及其他環(huán)境因素，并通過實(shí)驗(yàn)來確定具體的濃度范圍，在細(xì)胞進(jìn)行慢病毒感染前用不同濃度的G418培養(yǎng)細(xì)胞；

2.復(fù)蘇細(xì)胞：將細(xì)胞傳2-3代，待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后，再傳代，計(jì)數(shù)，大約2000個(gè)/孔鋪板于24孔培養(yǎng)板中；

3. 以哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選為例：

1. 用培養(yǎng)基將G418溶液稀釋為0 ug/ml、400 ug/ml、500 ug/ml、600 ug/ml、700 ug/ml、800 ug/ml、900ug/ml、1000ug/ml、1100ug/ml、1200ug/ml24孔板，每孔1ml培養(yǎng)基（含有G418的完全培養(yǎng)基），每個(gè)濃度3-4個(gè)重復(fù)；

2. .12小時(shí)后換液，將培養(yǎng)孔中培養(yǎng)基吸除，PBS洗滌一次，每孔加入不同濃度篩選培養(yǎng)基，隔天更換一次篩選培養(yǎng)基，培養(yǎng)10-14天，以最低細(xì)胞全部死亡濃度為基準(zhǔn)。

確定G418濃度后開始感染細(xì)胞：

3. 將需要感染的細(xì)胞鋪6孔板（20萬(wàn)/孔），第二天轉(zhuǎn)染，6小時(shí)后換新鮮正常培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后加最佳篩選濃度G418培養(yǎng)基，隔天換液；

4. 換液一兩次后（換液后培養(yǎng)過夜），細(xì)胞達(dá)50%-80%時(shí)，吸出所有培養(yǎng)液，離心3000-4000rpm，棄上清，加入2倍體積新鮮最佳篩選濃度培養(yǎng)液，0.22um過濾，混勻4℃?zhèn)溆茫?/span>

5. 培養(yǎng)6天左右細(xì)胞大量死亡時(shí)，可以換用適應(yīng)性培養(yǎng)基，即5中所配制?；蛘呖梢栽黾友鍧舛扰囵B(yǎng)，例如原來用10%血清，此時(shí)則可以采用20%血清；

6. .培養(yǎng)10天后將G418濃度減半，維持篩選壓力；

7. 篩選約14天后可見有抗性xx細(xì)胞出現(xiàn)，采用單克隆法或者刮除陰性克隆進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)和擴(kuò)增。

聲明：產(chǎn)品僅科研使用。