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產(chǎn)品描述/Products Description
一、適用于組織,細胞,細菌等裂解,裂解后可保留蛋白互作用
二、實驗步驟
1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶放置在冰上, 用吸液管吸出培養(yǎng)液。加入足夠的冷的 PBS在培養(yǎng)瓶中充分洗滌細胞表面,以洗去瓶中殘留的培養(yǎng)基,倒掉PBS ,重復以上操作2-3遍。在最后一次洗滌中盡可能吸干殘留的PBS,盡量在冰上操作。
2、 向培養(yǎng)瓶中加入冷的RIPA 裂解緩沖液 (每75cm2 培養(yǎng)瓶加1ml). 然后用細胞刮子沿著瓶壁開始刮細胞,如果所需要刮的同種細胞有多瓶,則將第一瓶刮下的細胞液吸出轉(zhuǎn)入下一瓶中繼續(xù)刮 (由于處理后的細胞裂解液較粘稠,所以宜用直徑大點的吸液管吸取)。
3、 吸出刮好的細胞裂解液置于14ml 離心管中 (置于冰上),然后重復步驟2以刮取剩下的細胞。
4、 盡可能將多的細胞裂解液收集到14ml的離心管中,樣品插入冰盒進行超聲,超聲強度以不產(chǎn)生泡沫為準,超聲每次2-3秒,重復3-4次。如仍有細胞碎片或沉淀,應離心10000rpm,10分鐘,留取上清。
5、 取出小量細胞裂解液測其蛋白濃度(用Biorad Bradford 試劑盒或紫外分光光度計,在A280測定),分裝保存在 -70℃。
運輸與儲存:
干冰運輸,-20℃保存
聲明:產(chǎn)品僅科研使用。






