細(xì)胞活性檢測旨在了解細(xì)胞的生存狀態(tài)活性，是否適合做后續(xù)的實驗，在病毒轉(zhuǎn)染實驗中細(xì)胞活性差也是轉(zhuǎn)染不成功的因素之一，其次用于藥物研究，對活細(xì)胞進行藥物研究，是對最小生命體的研究擴展到對整個機體的功能藥物特征的了解，那么細(xì)胞活性檢測怎么做？以下是我們技術(shù)整理的文稿之一，關(guān)注啟達生物，實驗操作不迷路:

該操作步驟采用PicoGreen 96孔板技術(shù)。該方法用于評估不同腫瘤細(xì)胞系對化療藥物的敏感性。

試劑

含有10%FBS的培養(yǎng)基

PicoGreen

TryLE express（胰蛋白酶）(啟達生物，貨號：SD0003)

磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）(啟達生物，貨號：SD0029)

去離子水

耗材

96孔培養(yǎng)板

TECAN Genios儀器（PHENIX）

恒溫箱

金屬薄片

分光光度計

1. 吸出培養(yǎng)基，用5 ml PBS洗滌一次。加入2ml tryLE express。細(xì)胞分離后，加入10ml完全培養(yǎng)基。用5-10毫升移液管移取細(xì)胞懸浮液，制成單細(xì)胞懸浮液。這一步驟非常重要（要獲得單細(xì)胞懸浮液，請將移液管尖端放在培養(yǎng)瓶底部，然后通過將細(xì)胞懸浮液從移液管中擠出來推出細(xì)胞懸浮液）。

2. 計數(shù)細(xì)胞并稀釋至1 x 10^5/ml，將細(xì)胞置于100μl（1 x10^3/孔）的96孔板中。

3. 將感興趣的藥物稀釋成一系列濃度，并以100μl的量加入孔中（藥物按最終濃度的2倍制備）。

4. 將孔板放在37°C、5%二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)1周，其間需要按正常換液次數(shù)換液

輕輕吸掉孔板培養(yǎng)基。然后擦拭以去除剩余的培養(yǎng)基。

5. 用PBS 200μl/孔洗滌兩次。通過搖動孔板輕輕擦拭除去PBS。

6. 向每個孔中加入100μl去離子水。將培養(yǎng)板放入37°C、5%CO2的培養(yǎng)箱中1小時。

7.在去離子水中以1:200稀釋PicoGreen（需要100μl/孔）。一定要計算出你需要多少。用箔紙包裹盤子，在室溫下靜置1小時（如果你很忙，這一步可以在一夜之間完成）。

8. 用分光光度計測量板的熒光強度。

處理數(shù)據(jù)：

存活率=實驗孔的平均熒光強度x 100%

對照井中的平均熒光強度

注：PicoGreen是一種選擇性結(jié)合dsDNA的熒光染料，其特性與SYBR Green I類似。它在480 nm處具有最大激發(fā)，在520 nm處具有發(fā)射。

References/參考文獻：

1. Ahn, S. J., Costa, J. and Emanuel, J. R. (1996). PicoGreen quantitation of DNA: effective evaluation of samples pre- or post-PCR. Nucleic Acids Res 24(13): 2623-2625.

2. Enger, O. (1996). Use of the fluorescent dye PicoGreen for quantification of PCR products after agarose gel electrophoresis. Biotechniques 21(3): 372-374.