

來(lái)源:啟達(dá)生物 瀏覽量:1600 發(fā)布時(shí)間:2023-10-12
提取的細(xì)胞不純?cè)趺崔k?按照下列方法進(jìn)行磁珠篩選,輕松搞定細(xì)胞不純的問(wèn)題。
1.準(zhǔn)備好磁珠和其他需要用到的試劑,所有分選試劑的儲(chǔ)藏溫度應(yīng)該是2-8C。過(guò)低或過(guò)高的溫度都會(huì)影響有效期,從而影響產(chǎn)品的使用效果;
2.提前預(yù)熱試劑,所有的試劑和樣本在使用之前都應(yīng)該平衡到室溫 (15-25C);
3.全部操作都應(yīng)該在超凈臺(tái)或者生物安全柜內(nèi)進(jìn)行,室控制在15-20℃;
4.手動(dòng)處理樣本要求比較高的試驗(yàn)室操作技術(shù)和細(xì)心的操作。用 BeadRetriever 時(shí)將樣本轉(zhuǎn)移至試管的操作應(yīng)該在距離已經(jīng)準(zhǔn)備好的樣本至少 1米的區(qū)域進(jìn)行;
5.磁珠使用前必須震蕩混勻;
6.在處理極其粘稠或是含脂量很高的樣本時(shí).可以用到稀釋。推薦使用特定的洗滌續(xù)沖液(PBS-Tween) 來(lái)稀釋樣本;
7.使用 360”旋轉(zhuǎn)混合器來(lái)孵育磁珠。建議從頭到底的旋轉(zhuǎn)幾次;
8.在室溫下保持 10 分鐘孵育時(shí)間。過(guò)多的孵育對(duì)靶細(xì)胞或靶分子的復(fù)原能力僅有輕微的提升,但卻增大了非特異性結(jié)合的可能;
9.洗滌要徹底,而且要按照規(guī)定的次數(shù)進(jìn)行;
10.輕微的混勻液體,而不是震蕩搖勻。在加磁場(chǎng)之前,要確保磁珠適當(dāng)?shù)募拥搅藵L液里;
11.當(dāng)把磁珠集中在一個(gè)小球里的時(shí)候,用90°的 rock-n-roll 動(dòng)作在特定的時(shí)間內(nèi)對(duì)每個(gè)旋轉(zhuǎn)進(jìn)行 1/2 的操作;
12.小心的去處懸浮液。手工將液體吸出試管而不能空吸。從樣本試管吸出磁珠后,因?yàn)檫@些液體要丟棄,所以會(huì)引起靶細(xì)胞或是靶分子的缺失;
13.額外的洗滌步驟可以減少背景干擾,但也會(huì)峰低靶細(xì)胞的回收效率;
14.如果考慮到背景污染,可以在每次洗滌步驟后更換離心管。很多微生物都可以粘到管壁上,更換可以減少脂質(zhì)體污染。

