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一看就會：細(xì)菌感染細(xì)胞模型的操作步驟
來源：啟達(dá)生物 瀏覽量：1234 發(fā)布時間：2025-04-18
細(xì)胞感染細(xì)菌模型在病原體與宿主相互作用、抗菌藥物研發(fā)與篩選、感染性疾病治療研究、疫苗效果評估與研發(fā)以及環(huán)境監(jiān)測與食品安全等多個方面都有廣泛的應(yīng)用.但是在感染過程中稍不注意出現(xiàn)雜菌或者細(xì)胞死亡的現(xiàn)象。
1.將需要感染的細(xì)胞復(fù)蘇好，待細(xì)胞生長平穩(wěn)并達(dá)到90%以上的匯合度；
2.取-70℃保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株50μL于5mL的液體LB中，置于37℃水浴恒溫振蕩器中200～300r/min培養(yǎng)12～14h讓其復(fù)蘇；
3.將復(fù)蘇好的菌群至于瓊脂板上，于37℃溫箱中倒置培養(yǎng)6～10h，然后于無菌條件下挑取單個菌落于5mL LB培養(yǎng)基中，37℃水浴振蕩培養(yǎng)6～10h，配制成4×10^8/mL的菌液；
5.過夜后用無菌D-HanK′s洗滌3次，每孔加入100ul的菌液感染細(xì)胞，并在恒溫恒濕細(xì)胞培養(yǎng)箱中相互作用2 h后用無菌PBS洗滌3次，隨后加入1 mL含氯霉素(終濃度34 μg/mL)基礎(chǔ)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)1 h，然后用無菌PBS輕柔洗滌細(xì)胞3次，再加入1 mL DMEM繼續(xù)培養(yǎng)1、2、4、6、8 h，后用無菌PBS輕柔洗滌3次。
感染模型的檢測方法為：Hoechst33258染色法或Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)。
1000X支原體清除劑：
1.采用抗支原體多肽合成劑配制，未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒性作用，且治療簡單，可治愈99%以上的細(xì)胞支原體感染。
2.靈活多用 ，稀釋1000倍加入細(xì)胞培養(yǎng)兩代可清除支原體 ，稀釋2000倍可預(yù)防細(xì)胞支原體感染。
1.采用小分子抗生素合成配制，對細(xì)胞毒性小，殺菌能力強(qiáng)，第二天可看到明顯的效果。
2.使用方便， 1ml稀釋1000倍即可使用。
