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值得收藏:WB實(shí)驗(yàn)的緩沖液配方

來(lái)源:啟達(dá)生物  瀏覽量:1281  發(fā)布時(shí)間:2025-07-31

Western blot是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),用于檢測(cè)和分析蛋白質(zhì)的存在和表達(dá)水平。Western blot包括蛋白質(zhì)提取、電泳分離、轉(zhuǎn)膜、免疫染色等步驟。下面是一些常用的Western blot相關(guān)緩沖液(Buffer)配方。
RIPA緩沖液:
RIPA緩沖液是一種用于蛋白質(zhì)提取的常用緩沖液,可以有效地裂解細(xì)胞膜并釋放蛋白質(zhì)。以下是一種常用的RIPA緩沖液配方:
-氯化鈉(NaCl):150mM
- 三羥甲基氧甲烷(TrispH 7.4: 50 mM
-適量氫氧化鈉(NaOH)調(diào)整pH
- 二硫化苯甲醇(β-mercaptoethanol) 或 DTT1%
- 甘油(glycerol):1%
-磷酸鹽緩沖液:10mM
-磷酸二氫鉀(KH2PO4):1.5mM
-多普酰轉(zhuǎn)酶抑制劑(PMSF):1mM
-乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA):1mM
-硫酸鎂(MgSO4):1mM

SDS-凝膠電泳緩沖液:
SDS-凝膠電泳是Western blot的重要步驟之一,SDS-凝膠電泳緩沖液配方:|
- Tris酸:25 mM
- 甘氨酸(Glycine):250 mM
-SDS0.1%
-水:適量

轉(zhuǎn)膜緩沖液:
轉(zhuǎn)膜緩沖液用于將電泳分離得到的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上進(jìn)行進(jìn)一步的分析。配方如下:
-二甲基亞砜(DMSO):20%
-甘氨酸:192mM
-氯酸鈉(NaClO3):20mM
- Tris酸:25 mM
-水:適量

阻斷緩沖液:
阻斷緩沖液用于在免疫染色之前預(yù)防非特異性結(jié)合,配方如下:
-牛血清蛋白(BSA):3-5%
-牛血清白蛋白(BSA):0.1-0.3%
-磷酸鹽緩沖液:10mM
- Triton X-100Tween-200.1-0.5%
-NaN30.01-0.02%

抗體染色緩沖液如下配制:
-磷酸鹽緩沖液:10mM
-硼酸:1mM
-EDTA5mM
- Tween-200.1-0.2%
-低脂牛奶粉(非脂奶粉):5-10%
-NaN30.02%

備注
:以上都是常規(guī)基本配方,可能需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求進(jìn)行調(diào)整。不同實(shí)驗(yàn)室和研究人員可能會(huì)根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行配方上的調(diào)整。
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