預(yù)準(zhǔn)備

預(yù)冷離心機、PBS、裂解液（RIPA 或 NP-40 等）

裂解液臨用前加蛋白酶/磷酸酶抑制劑（PMSF 1 mM或Na?VO? 1 mM或leupeptin 1 μg/mL 等）

收集細(xì)胞

貼壁：棄培養(yǎng)基 → 預(yù)冷 PBS 洗 2 次 → 用細(xì)胞刮（45° 角，輕柔）刮下細(xì)胞 → 吸入 1.5 mL EP 管

重懸：直接 600 ×g 4 °C 離心 5 min 收細(xì)胞 → PBS 洗 2 次

裂解

加裂解液比例參考：

6 孔板 1 孔 ≈ 100–150 μL

60 mm 皿 ≈ 100 μL

10 cm 皿 ≈ 300–400 μL

1×10? 細(xì)胞 ≈ 100 μL重懸細(xì)胞

冰上靜置 5 min（組織 3×30 s 間隔研磨）→ 如需要可短時超聲 3×5 s（冰浴間隔）

徹底裂解后 4 °C 12000–14000 ×g 離心 15–20 min，去碎片

取上清

先讓離心機完全停轉(zhuǎn)再開蓋

傾斜 45°，槍頭貼壁從液面下 2–3 mm 緩慢吸取，避免吸到沉淀；如仍渾濁可二次離心

定量與保存

BCA/Bradford 測蛋白濃度后調(diào)平

加入 4×SDS 上樣緩沖液 → 95–100 °C 煮沸 5 min 變性

短期 4 °C 存放 (<24 h)，長期 ?20 °C/?80 °C 分裝凍存，避免反復(fù)凍融

常見注意事項：

全程冰上操作，抑制蛋白酶活性

裂解液用量寧可略少，以提高蛋白濃度；難溶蛋白可延長裂解時間或改用含 SDS 的強裂解液。

離心機必須配平，轉(zhuǎn)速/時間不足會導(dǎo)致上清中殘留碎片，堵塞凝膠孔洞。

若下游做 Co-IP，盡量用非離子型去垢劑（NP-40、Triton X-100），避免 SDS 破壞蛋白復(fù)合物。

推薦產(chǎn)品：
RIPA 細(xì)胞裂解液(貨號：SD0072)
1. 適用于組織，細(xì)胞，細(xì)菌等裂解，裂解后可保留蛋白互作用。

NP-40 細(xì)胞裂解液(貨號：SD0071)

1. 裂解后可保留蛋白互作，適用于CoIP、Pull-down、MST等實驗，裂解液臨用前加蛋白酶/磷酸酶抑制劑（PMSF 1 mM或Na?VO? 1 mM或leupeptin 1 μg/mL 等，能夠破壞細(xì)胞膜而不影響蛋白質(zhì)和RNA的結(jié)合。
2. 它還能幫助溶解細(xì)胞膜和細(xì)胞器，釋放蛋白質(zhì)和RNA。NP-40裂解液因其溫和性、高效性、低干擾性和廣泛適用性，成為動物細(xì)胞裂解的常用試劑。

紅細(xì)胞裂解液(貨號：SD0063)
1. 紅細(xì)胞裂解液是利用細(xì)胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理來裂解無核紅細(xì)胞的。    

2. 紅細(xì)胞裂解液經(jīng)無菌處理，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細(xì)胞的去除。