細(xì)胞活性檢測除了CCK8和MTT外還有一個(gè)XTT檢測方法哦！

細(xì)胞活性檢測XTT法是一種檢測細(xì)胞增殖和活性的方法。其檢測原理是：XTT是一種與MTT類似的四唑氮衍生物，可被活細(xì)胞線粒體脫氫酶還原成水溶性的棕色甲肷產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子耦合共同使用時(shí)，甲肷的生成量與細(xì)胞的增殖程度呈正相關(guān)。

在細(xì)胞活性檢測實(shí)驗(yàn)中，將XTT試劑和電子偶聯(lián)試劑按一定比例混合后，加入到待測細(xì)胞中，然后進(jìn)行孵育。在孵育過程中，活細(xì)胞會(huì)將XTT試劑還原成甲肷產(chǎn)物，而死細(xì)胞則無法進(jìn)行這種還原反應(yīng)。通過檢測甲肷產(chǎn)物的生成量，可以判斷細(xì)胞的增殖程度和細(xì)胞活力。

使用XTT法進(jìn)行細(xì)胞活性檢測具有操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，該方法對(duì)細(xì)胞毒性低，適用于各類哺乳動(dòng)物細(xì)胞活性的檢測。

試劑與材料：

（1） XTT：用60℃預(yù)熱培養(yǎng)液配制成6.6mmol/L，過濾除菌，現(xiàn)配現(xiàn)用； 

（2） 吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）：用PBS配制成220mmol/L，4℃避光保存20天； 

（3） XTT/PMS：XTT與PMS按1：1混合（臨用時(shí)混合）。

XTT法操作步驟：

（1）刺激增殖反應(yīng)，按照一定比例將XTT試劑與電子耦合試劑混合，加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間；

（2） 于終止培養(yǎng)前2h，每孔加入XTT/PMS 20μl，混勻后再培養(yǎng)2h； 

（3） 在酶標(biāo)儀上450nm處測定光吸光度，參考波長為655nm。 

【結(jié)果分析】 

計(jì)算SI：SI＝試驗(yàn)孔OD均值/對(duì)照孔OD均值 

XTT法操作注意事項(xiàng)：

（1）絲裂原的質(zhì)量和活性是測定淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的關(guān)鍵因素。不同廠家的產(chǎn)品，質(zhì)量、活性不同，其使用的最佳刺激量也不同，因而在實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)事先確定其最佳刺激量。 

（2） 檢測T細(xì)胞增殖反應(yīng)，絲裂原用PHA或ConA；B細(xì)胞增殖反應(yīng)用LPS或SPA；T、B細(xì)胞增殖反應(yīng)則用PWM。 

（3） 增殖反應(yīng)的細(xì)胞應(yīng)保持高活性，一般應(yīng)≥95％。應(yīng)用單抗分離制備的反應(yīng)細(xì)胞因保存劑（如NaN3）或抗體的直接作用可抑制細(xì)胞的增殖。此外，增殖細(xì)胞的濃度過高或過低均不利于細(xì)胞生長。 

（4） 細(xì)胞培養(yǎng)液應(yīng)無菌、無支原體污染，特別是小牛血清應(yīng)加熱滅活補(bǔ)體，避免LPS或其他能促進(jìn)細(xì)胞增殖物的污染。因此，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)選擇本底低的小牛血清。用人"AB"型血清或自體血清也應(yīng)加熱滅活補(bǔ)體。