基因突變是導(dǎo)致遺傳性疾病或癌癥等疾病發(fā)生的主要原因之一。檢測(cè)基因突變能夠促進(jìn)疾病的早期診斷和治療。下面簡(jiǎn)述幾種常用的基因突變檢測(cè)方法及其基本原理。

1. Sanger測(cè)序法

      Sanger測(cè)序法是目前應(yīng)用最廣泛的基因突變檢測(cè)方法之一。其基本原理是利用DNA聚合酶、引物、dNTP以及缺少一種ddNTP（隨機(jī)的一種，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中可替代dNTP參與DNA鏈合成反應(yīng)）構(gòu)建DNA擴(kuò)增體系。在聚合過(guò)程中，隨機(jī)的ddNTP會(huì)在某個(gè)位置上被插入DNA鏈，從而阻止DNA鏈的繼續(xù)延伸。通過(guò)這種方法，可以生成一系列長(zhǎng)度不同的DNA碎片。將這些DNA碎片分別進(jìn)行熒光標(biāo)記并電泳分離得到熒光帶，最終可得出突變位點(diǎn)所在的DNA碎片。

2. 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

       等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是一種恒溫下DNA擴(kuò)增的方法。其基本原理是利用異鏈替換酶、聚合酶和RNA剪切酶等多種酶基于循環(huán)式DNA擴(kuò)增機(jī)制，在恒溫條件下完成DNA擴(kuò)增的過(guò)程。在等溫?cái)U(kuò)增過(guò)程中，通過(guò)設(shè)計(jì)合適的引物，可以在RNA剪切酶的作用下產(chǎn)生長(zhǎng)度不同的RNA片段。通過(guò)對(duì)這些RNA片段的檢測(cè)，可以分析出DNA序列中的特定突變。

3. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

       聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)是最常用的DNA擴(kuò)增方法之一。其基本原理是通過(guò)引物誘導(dǎo)DNA聚合酶催化多輪DNA復(fù)制過(guò)程，將少量的DNA擴(kuò)增到足夠的數(shù)量以便進(jìn)行檢測(cè)。在PCR反應(yīng)過(guò)程中，引物的設(shè)計(jì)需要確保其與目標(biāo)DNA序列高度特異性的結(jié)合，以避免與其他DNA序列的雜交發(fā)生。PCR擴(kuò)增過(guò)程的終止通常由DNA聚合酶的離開(kāi)或核酸內(nèi)切酶的作用結(jié)束?？梢杂肞CR技術(shù)檢測(cè)存在于目標(biāo)DNA序列中的特定突變。

      堿基擴(kuò)增技術(shù)是一種基于聚合酶的DNA擴(kuò)增方法。其基本原理是通過(guò)PCR擴(kuò)增，將包含某個(gè)特定堿基的DNA擴(kuò)增至足夠的數(shù)量，然后與T7RNA聚合酶合成特定的RNA產(chǎn)物。此后利用核酸雜交技術(shù)在固定于膜上的堿基序列探針與RNA產(chǎn)物之間進(jìn)行雜交反應(yīng)，對(duì)RNA探針與被錨定的DNA引物進(jìn)行探測(cè)，以確定其擴(kuò)增產(chǎn)物是否存在特定的突變。通過(guò)這種方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)單一堿基缺失和插入突變的檢測(cè)。

      
               SW948 [SW-948]                                                     U-937                                                          LLC-Luc