都給整理啦，避免提取原代細(xì)胞容易踩的坑

原代細(xì)胞培養(yǎng)，看似一個簡單的問題，但實際真的經(jīng)歷過百轉(zhuǎn)遷回的實驗摸索后才發(fā)現(xiàn)真的要總結(jié)一下原代培養(yǎng)的這些小竅門：

先看看啥是原代細(xì)胞吧

原代細(xì)胞是從活體組織（例如活檢材料）中直接獲取，并在體外培養(yǎng)的細(xì)胞。由于這些細(xì)胞經(jīng)歷極少的群體倍增，因此比連續(xù)（腫瘤或人工永生化的）細(xì)胞系更能代表其來源組織的主要功能成分，使原代細(xì)胞成為體內(nèi)狀態(tài)更具代表性的模型;

處理樣本容易踩的坑：

錯誤的方式：樣本解凍后直接開始提取細(xì)胞

答：很容易讓細(xì)胞污染，在凍存樣本之前無論經(jīng)過什么樣的處理，在接收樣本開始處理時，我們都需要先用hanks液進(jìn)行清洗1-2次，再用純雙抗浸泡或者吹打30秒-1分鐘，以完全排除污染。

切記切記要不然就會功虧一簣。

提取細(xì)胞時容易踩的坑：

1. 消化液不對，常見的組織消化液有膠原酶1，膠原酶2，各大公司生產(chǎn)的各種特效的胰酶等等，不同的部位的組織使用對應(yīng)的消化液，讓原代提取事半功倍；比如上皮細(xì)胞的提取通常用胰酶即可 ，處理好組織后，將組織浸泡在胰酶中，置于4°，第二天輕松得到上皮細(xì)胞。

提出來的細(xì)胞魚龍混雜；

本來要提取的是內(nèi)皮細(xì)胞；

一頓神操作下來

放培養(yǎng)箱后第二天一瞅，

自己都呆了，

眼花繚亂都不足以形容自己提取的這盤細(xì)胞，

隨便數(shù)一下起碼4.5種

以下是一些原代的正常圖片,僅供參考,有其他形態(tài)對比需要后臺聯(lián)系我們哦：

上皮細(xì)胞           內(nèi)皮細(xì)胞          成纖維細(xì)胞        平滑肌細(xì)胞

原代細(xì)胞去雜質(zhì)需要掌握的方法：

1. 采用時差貼壁法：成纖維細(xì)胞1-2小時可以貼上，角化細(xì)胞4小時內(nèi)，膠質(zhì)細(xì)胞1小時左右全部貼壁，神經(jīng)細(xì)胞6小時開始貼壁，一般8-10個小時貼壁完成，最長的細(xì)胞貼壁時間也在48小時內(nèi)，要是超過48小時沒有貼壁，就狠心扔掉吧，那已經(jīng)不是你的寶了

2. 采用專用培養(yǎng)基去細(xì)胞雜質(zhì)：各種原代細(xì)胞都有其需要的生長因子，激素和受體，因此，各大商家經(jīng)過對細(xì)胞長期的研究，都會有各種各樣的針對原代細(xì)胞培養(yǎng)采用的培養(yǎng)體系

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啟達(dá)生物擁有32種原代細(xì)胞培養(yǎng)體系， 18種腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)體系，16種類器官培養(yǎng)體系，這些都是以低血清和無血清方式供貨的哦

低血清和無血清培養(yǎng)體系首先有助力抑制雜細(xì)胞生長，提高目的細(xì)胞生長的速度，其次，啟達(dá)生物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中含有抵抗非目的細(xì)胞生長的小分子化合物，抑制雜細(xì)胞生長；再次，生長因子含有目的細(xì)胞生長所需蛋白，為目的細(xì)胞的生長保駕護(hù)航

3. 磁珠篩選法：磁珠分離是一種快速，高效，清潔的過程，科學(xué)家用其取代過濾，離心和分離技術(shù)。 磁珠和磁微粒通過功能化的抗原，抗體，催化劑，蛋白或核酸發(fā)揮作用，對細(xì)胞，細(xì)菌，病毒和其他生物體發(fā)揮作用。 然后利用磁性分離器將這些成分從復(fù)雜的基質(zhì)中分離出來。 結(jié)果就是從目標(biāo)整體中濃縮富集出樣本,磁珠篩選的步驟公眾號之前發(fā)過，有需要的同學(xué)往回看哦

4.高速離心沉淀法去雜質(zhì)，顧名思義使用重力離心，不同種類的細(xì)胞會聚集到一個層面，一般在提取血液細(xì)胞的時候用的最多

點個關(guān)注，細(xì)胞提取不迷路，下一節(jié)，我們將整理怎么避免原代細(xì)胞提取時污染！