類器官的培養(yǎng)是一種利用干細(xì)胞技術(shù)，模擬人體內(nèi)器官發(fā)育過程，構(gòu)建出具有類似器官結(jié)構(gòu)和功能的三維細(xì)胞培養(yǎng)模型。這種模型能夠幫助科學(xué)家更好地理解器官的發(fā)育、疾病的發(fā)生機(jī)制以及藥物的作用效果。類器官一般通過誘導(dǎo)和干預(yù)進(jìn)行類器官的純化，傳代也是培養(yǎng)類器官不可缺少的步驟；

但是消化類器官總是會(huì)莫名奇妙的出問題 ，有些類器官半天消化不下來，有些類器官換個(gè)液都能給沖下來，類器官怎么消化，來看看我們的總結(jié)吧！

一、如何判斷類器官可以消化了，小啟經(jīng)常采用以下三個(gè)方面來判斷：
1.更換新鮮的培養(yǎng)基后，第二天培養(yǎng)基就變黃了，并且類器官在4X鏡下整體有50%以上的匯合；

2.有少部分類器官和細(xì)胞發(fā)生脫落現(xiàn)象，從Matrigel中脫離，漂浮在培養(yǎng)基中；

3. 細(xì)胞覆蓋Matrigel液滴的邊緣，顯微鏡下已經(jīng)看不到Matrigel膠，整個(gè)底部都是遷移的類器官。

判斷好類器官可以進(jìn)行消化了，我們就來整理下小啟在消化類器官踩的坑吧：

第一坑：打死都消化不下來的類器官：

腦癌類器官以培養(yǎng)時(shí)間長著稱，正常的培養(yǎng)沒個(gè)把月根本測(cè)不出類器官指數(shù)，于是消化成了這個(gè)細(xì)胞的難點(diǎn) ，類器官培養(yǎng)的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)之一：培養(yǎng)的類器官在同一個(gè)孔中盡量不要時(shí)間太久， 越久越消化不下來，

培養(yǎng)超過一個(gè)月的類器官，不建議使用直接使用組織消化液消化，采用以下步驟消化類器官

1.先用刮刀先把類器官刮下來，加適量的PBS洗滌后，收集到離心管中；

2.采用100um的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，以攔截比較大塊的類器官；

3.準(zhǔn)備新的離心管，將濾網(wǎng)反轉(zhuǎn)用PBS沖洗，將大的類器官?zèng)_洗下來；

4.將沖洗的類器官混懸液進(jìn)行離心去除PBS，加入適量的組織消化液消化；37°水浴消化5分鐘后，用1000ul槍頭輕輕吹打20次左右，立刻加入同等的完全培養(yǎng)基終止。

5.配平，1500轉(zhuǎn)離心3分，對(duì)于比較容易分散的類器官，如肝癌和腎癌類器官，可以采用瞬離的方法，瞬離的方法如下：設(shè)定轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)，配平，啟動(dòng)離心機(jī)，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到3000轉(zhuǎn)后立即按下停止鍵，待離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)后，拿出離心管。

腦癌類器官消化后重新鋪板

第二坑：輕輕一碰就掉落的類器官

肝癌和滋養(yǎng)層是最容易掉落的類器官，即使有Matrigel給其吸附，但是稍不注意換個(gè)液都能掉落，前功盡棄，而且這類的類器官有趨光性，一旦Matrige稍微鋪的不均勻或者震板沒有做好，就大的很大，小的很小，而越大的越容易掉落，看著都惱火

                 組織消化酶（啟達(dá)生物，貨號(hào)：SD0013)

消化容易脫落的類器官采用的方法：

1.預(yù)熱組織消化酶，一定要預(yù)熱；

2.去除舊的培養(yǎng)基，向每個(gè)孔中加入500ul預(yù)熱的組織消化酶，以從Matrigel中回收類器官

3. 輕輕吸取組織消化酶和Matrigel液滴混合物上下2-3次，將Matrigel和類器官從孔中移出。

4. 將混懸液轉(zhuǎn)移到新無菌15 mL離心管中，每個(gè)15mL離心管最多可容納8個(gè)孔的類器官（即：體積約為4-6mL）

5. 將混合物在37℃水浴中孵育5分鐘，偶爾旋轉(zhuǎn)試管以混合類器官消化酶;

6. 用1000ul移液管抽吸類器官混懸液20-30次，以機(jī)械方式破壞和分離類器官為單細(xì)胞

7. 用相同體積的完全類器官培養(yǎng)基中和組織消化溶液

8. 將試管在1500轉(zhuǎn)下離心3分鐘；

9.鋪在預(yù)先準(zhǔn)備的培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)或者凍存；