一步搞定間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞的Protocol

離大譜：間充質(zhì)干細(xì)胞還可以誘導(dǎo)成神經(jīng)元細(xì)胞？Protocol我們技術(shù)都整理出來(lái)啦，就等著您來(lái)閱讀啦！

先上培養(yǎng)基:

間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞的操作步驟如下：

1. 準(zhǔn)備好MSCM細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞包被液（啟達(dá)生物，貨號(hào)：SD0044）

使用MSCM生長(zhǎng)培養(yǎng)基，在用包被液包被過(guò)的培養(yǎng)瓶中接種間充質(zhì)干細(xì)胞，接種密度為4000個(gè)/cm2。

2. 每1-2天換液一次，將細(xì)胞培養(yǎng)至80%的飽和度

下面我們準(zhǔn)備誘導(dǎo)啦！

一、誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化

使用干細(xì)胞神經(jīng)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)，同時(shí)用MSCM生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)一個(gè)樣本作為陰性對(duì)照。

以6孔板為例，當(dāng)細(xì)胞到達(dá)80%以上的匯合度后立即開(kāi)始誘導(dǎo)，

1. 將需要誘導(dǎo)細(xì)胞用D-PBS清洗兩次，以去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基；

2. 每個(gè)孔加1ml左右的干細(xì)胞神經(jīng)分化培養(yǎng)基打十字搖勻后置37°培養(yǎng)箱培養(yǎng)

3. 誘導(dǎo)至少培養(yǎng)3天，期間每48小時(shí)更換一次培養(yǎng)基。注意，誘導(dǎo)后1天就可能觀(guān)察到細(xì)胞顯著的形態(tài)學(xué)變化。

換液需注意的小事項(xiàng):請(qǐng)沿孔壁慢慢滴入；若細(xì)胞背景干凈請(qǐng)謹(jǐn)慎在細(xì)胞誘導(dǎo)期間用PBS沖洗細(xì)胞，容易造成細(xì)胞的脫落；

給同學(xué)們來(lái)組我們誘導(dǎo)的圖片吧：（Rmsc-bm/SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)）

Day 1:Rmsc-bm細(xì)胞誘導(dǎo)前的匯合度

Day 3:RMSC-bm誘導(dǎo)的第三天

Day 8:RMSC-bm誘導(dǎo)的第八天

收獲和驗(yàn)證細(xì)胞

神經(jīng)元驗(yàn)證最簡(jiǎn)單的方法莫過(guò)于電擊驗(yàn)證， 但是很多實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有電擊材料，我們想出了一個(gè)好辦法 ，買(mǎi)個(gè)打火機(jī)，把它點(diǎn)火的電池取下來(lái) ，放細(xì)胞培養(yǎng)孔里輕輕一按，神經(jīng)元細(xì)胞立馬展現(xiàn)出它特有的收縮反應(yīng)，此操作要注意按壓的火力，要是電流過(guò)高，細(xì)胞就會(huì)噶了，此方法適合只是驗(yàn)證，不需要發(fā)大pepar的同學(xué)們 ，發(fā)大pepar的同學(xué)還是需要按部就班的來(lái)；

MSC來(lái)源的神經(jīng)細(xì)胞可以選擇性地根據(jù)“神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記物的檢測(cè)”來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞的特征；經(jīng)誘導(dǎo)后的MSC細(xì)胞 具有神經(jīng)元的主要NeuN、Nestin、等神經(jīng)元特異性蛋白表達(dá)；這里就要進(jìn)行免疫熒光染色啦，有興趣的同學(xué)可以翻看我們往期的文章有細(xì)胞免疫熒光染色操作的詳細(xì)介紹哦，除此之外還需要進(jìn)行WB驗(yàn)證。