B細(xì)胞在免疫發(fā)展中發(fā)揮中心作用。他們?cè)诠撬?/span>中最初進(jìn)入血液作為幼稚B細(xì)胞，其可以遷移到淋巴組織，諸如脾，淋巴結(jié)，扁桃體，為進(jìn)一步發(fā)展，一些幼稚B細(xì)胞遷移到淋巴濾泡，其中生發(fā)中心B細(xì)胞可以分化成記憶B細(xì)胞和plasmablasts(PBS)/漿細(xì)胞(PC)的。雖然大多數(shù)PBS/PC最終進(jìn)入血液，少數(shù)最終駐留在骨髓經(jīng)受終端分化為長(zhǎng)壽命的漿細(xì)胞。沒有滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖很少 ，部分細(xì)胞不會(huì)增殖，需要滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)。

先上B細(xì)胞的提取吧：

1. 靜脈取血 2ml，加入含肝素溶液(50ug／ml血樣本)的試管中，混勻，使血液抗凝。用 PBS溶液1：1稀釋。

2、吸取 2ml 淋巴細(xì)胞分離液（啟達(dá)生物，貨號(hào)：SD0059）置于刻度離心管中，然后將離心管傾斜 45°角，用毛細(xì)滴管將稀釋的全血沿管壁緩慢加至分離液上面，應(yīng)注意保持兩者界面清晰。

3、在 18℃～20℃下，使用水平離心機(jī)以 1500r/min 離心 20min。

4、小心取出離心管，用1ml移液器緩慢吸取第二層淋巴細(xì)胞，配平再次離心，若有紅細(xì)胞，可多用PBS洗滌一次。

5、棄上清，將沉淀細(xì)胞懸于培養(yǎng)基中備用。

再來B細(xì)胞的純化：

(a) 取1mg羧基磁珠(約100μl磁懸液，取用前超聲充分混勻)于1.5ml Ep管中，渦旋振蕩5-10min；

(b)取適量磁珠懸液，用 20 倍體積的 PBS+0.2%BSA 溶液重懸細(xì)胞后，置磁架上 5min，待磁珠完全被吸附

備注：（磁珠與單個(gè)核細(xì)胞或全血的比例為：0.5mg 磁珠/1×107 個(gè)單個(gè)核細(xì)胞或 1ml 全血）;

（c)用移液器小心吸去上清，以去除在儲(chǔ)存過程中從磁珠上脫落的二抗。用 100ul PBS+0.2%BSA 溶液重懸磁珠。加入一抗（一抗與磁珠的比例為：5ug 一抗/1mg 磁珠）混合均勻，室溫條件，在樣品混合儀上活化30min

(D)加入 2ml PBS+1.2%BSA 溶液，再置磁架上 5min。吸去上清，以去除未與二抗結(jié)合的一抗。重復(fù)操作一次。用 100ul PBS+0.2%BSA 溶液重懸磁珠。

（E）用B細(xì)胞完全培養(yǎng)基（啟達(dá)生物，貨號(hào)：P3901)調(diào)整待分離細(xì)胞的濃度為 1×107 細(xì)胞/ml，將細(xì)胞加入磁珠懸液中，置室溫 15min，中間輕微晃動(dòng)一次。然后置磁架上 10min。吸去上清。

(F)用B細(xì)胞完全培養(yǎng)基重懸磁珠結(jié)合的細(xì)胞后直接進(jìn)行培養(yǎng)。

好啦，看下圖，B細(xì)胞提取成功啦！

    Bcells 培養(yǎng)第一天      Bcells 培養(yǎng)第7天