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一眼就會的裸鼠成瘤操作
來源:啟達生物 瀏覽量:4412 發(fā)布時間:2022-08-11
細胞株移植瘤模型(cell derived xenograft, CDX),即將體外傳代培養(yǎng)的腫瘤細胞接種至免疫缺陷小鼠,裸鼠皮下荷瘤是指將人源或鼠源細胞注射到免疫缺陷的裸鼠皮下,通過其它條件來驗證腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。
腫瘤細胞有良性和惡性之分;癌細胞則是惡性,是會擴散的細胞。腫瘤細胞包含癌細胞,它們共同特點是從基因?平上失控的、能?限增殖的細胞。癌細胞有三個顯著的基本特征即:不死性、遷移性并且不會發(fā)生接觸抑制反應(yīng)。
常規(guī)較容易成瘤的細胞 :
Hep-G2(肝癌),NCI-H460(?細胞肺癌),97H(人肝癌細胞) 4T1(小鼠乳腺癌)SK-OV-3(卵巢癌),MCF-7(乳腺癌)SKBR3, A375/B16-F10(??? 素瘤細胞), ,H1299(肺癌), SPC-A-1(肺腺癌), HT-29/HCT116(結(jié)腸癌)MDA-MB-231 乳腺癌 , CT26 (??結(jié)腸癌細胞 ),U87 (?膠質(zhì)瘤細胞) , PC-3 (?前 列腺癌細胞)等
常用的小鼠表型:
荷瘤裸鼠選擇:
4-6周齡BALB/c-nu裸小?
操作步驟:
1.取處于對數(shù)?長期的細胞,細胞達80-90%左右密度為宜.
2.胰酶消化細胞后?預(yù)冷的PBS洗1-2遍,以去除細胞中殘余的?清。
3.?PBS或者0.85%生理鹽水吹打細胞沉淀?合適的濃度,?般?下瘤接種的細胞量為1-5×106個細胞/?,接種體積為0.1-0.2ml,因此細胞懸 液的濃度為1-5×107個細胞/ml,細胞消化后應(yīng)盡快接種到裸??下,?般盡量在半?時內(nèi)完成(如果接種量?,可以分批接種),途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝以 保持細胞的活性。
4.抓住小鼠的尾巴(遠離尾端),提起小鼠,抓住它的前腳,左?拇指和?指捏緊裸?頸背部?膚,?拇指夾住裸?尾巴;以方便注射,注射種植部位選擇?供豐富區(qū)域,如腋窩中后部。如果被咬,不要將動物從手上扔下來因為摔倒會傷害動物并導(dǎo)致動物死亡以及將來可能出現(xiàn)的細菌和病毒的遺留污染,
將老鼠從手指上移開的最佳方法是:
把你的手放回籠子里。這為小鼠提供了回家的路,它就會從你的手指跳下來回到籠子里。
5. ?槍將細胞懸液充分的吹散后接種,接種時,針頭在?下進針深?點,約1cm深,針頭在?下左右滑動?次,以便細胞接種成團,減少注射后細胞懸液從針眼溢出。
6. 根據(jù)腫瘤細胞的特性和接種細胞的量,?般?下成瘤的周期為1-2個?。腫瘤不宜?長過?,?般不要超過2000mm3,腫瘤??測量?般為1周兩次,游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2ab2 (a為長軸,b為短軸)
裸鼠荷瘤可能遇到的問題:
1.瘤塊長起來?消失?
腫瘤塊先縮?,后變?很常見,很可能是炎癥反應(yīng),腫瘤細胞被????吸收,繼續(xù)觀察腫瘤細胞吸收之后是否經(jīng)過?周還能長出來,長不起來建議換?
2.是否可以在?只??進?多個點接種?
不可以,?只??就只能接種?個點,因為?個???上有多個腫瘤塊的情況下,可能會相互影響。
3.腫瘤長不出來是怎么回事?
?:腫瘤?長周期很慢,?周開始?長腫塊,?約需要1~2個?才能長成腫瘤; ?:可能是細胞狀態(tài)差,活?不好,或是腫瘤細胞不易成瘤,需加?基質(zhì)膠輔助(基質(zhì)膠:PBS=1:1)或增?接種量或更換細胞系;
三:???可能是??周齡太?,或??免疫排斥,建議更換免疫缺陷程度更?的??(Nod-scid??)。
4.腫瘤體積相差很?,??不??
?先,并不是所有的腫瘤都能夠長得均?形態(tài)。其次,這可能跟??周齡及接種細胞量不?致導(dǎo)致,建議重新接種.
5. 皮下或皮內(nèi)腫瘤生長迅速,或生長到一定的大小后出現(xiàn)潰瘍和壞死現(xiàn)象?
考慮小動物感染原因造成,可對小動物提供支持治療預(yù)防感染的抗生素,可在小動物飲用水中施用抗生素(和其他藥物)原因如下:
-藥物在水中的穩(wěn)定性。
-小鼠喝水得以治療。
若小動物全身出現(xiàn)壞死和潰瘍作為皮下或皮內(nèi)自然生長模式的一部分腫瘤,長度低于1.5cm,導(dǎo)致皮膚破裂或滲出(液體或血液積聚)持續(xù)超過48-72小時而不閉合“傷口”通常需要對小動物進行安樂死處理。





