小姐姐問我們銷售：懸浮細(xì)胞怎么染色？啟達(dá)的解決方案來啦，做懸浮細(xì)胞染色的同學(xué)們一起收藏吧。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 收集細(xì)胞，細(xì)胞總數(shù)在1*10^6或者1*10^7左右的細(xì)胞量置于2ml的離心管中；

2. 加入2ml的PBS溫和上下顛覆，800g離心5分鐘，棄上清，為了完全消除血清的影響，,需反復(fù)清洗2-3次。

3. 準(zhǔn)備好干凈的載玻片，并經(jīng)過明膠或者多聚賴氨酸處理，也可以購買處理好的載玻片，買來即可用于實(shí)驗(yàn)。

4. 用移液管吸取適量的懸浮細(xì)胞液，滴在載玻片上，并讓液體自由的鋪散開來，以形成一單分子層結(jié)構(gòu)，并于室溫下讓細(xì)胞懸浮液自由干燥。

5. 用免疫熒光專用的畫筆在干燥的液面邊緣劃圈，以免后續(xù)的操作時(shí)液體流失。

6. 滴加適量的4%多聚甲醛緩沖液，室溫固定30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。

7. 0.4%Triton-X100室溫消化處理30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。

8. 2%BSA封閉，37度，30分鐘。

9. 輕輕甩去封閉液，勿洗，滴加一抗，4度孵育過夜。

10. PBS沖洗3次，每次5分鐘。

11. 避光滴加熒光二抗，37度孵育30分鐘（切記勿干）。

12. PBS沖洗3次，每次5分鐘。

13. 加入DAPI和10ul的PBS，室溫避光放置5分鐘

14. 加入含抗熒光淬滅劑的封片劑封片。

THP-1免疫熒光染色（啟達(dá)生物，貨號(hào)：CD0122)

觀察：

隔著液相在熒光顯微鏡下觀察染色結(jié)果，如果片子比較干凈，沒有殘留的雜質(zhì)顆粒和熒光顆粒，隨即用中性樹膠封片。

激光共聚焦顯微鏡下觀察染色結(jié)果。然后用專用的圖像處理軟件對(duì)不同激發(fā)波長(zhǎng)下的染色圖片進(jìn)行疊加處理，即可得到你所要的共存圖像。

K-562免疫熒光染色（啟達(dá)生物，貨號(hào)：CD0115)

二、懸浮細(xì)胞染色需要注意的小細(xì)節(jié)：

1. 片子處理完后，最好讓它自然干燥后再開始封片，否則殘留的水份或者PBS會(huì)影響封片后片子的色澤。

2. 中性樹膠不宜太稠，否則到時(shí)滴在片子上后不易鋪散開來。所以最好是買新鮮的中性樹膠，好像不貴的，用后瓶蓋蓋嚴(yán)，并用避光紙（錫箔紙）外包，避光保存。

3. 中性樹膠不宜滴加太多，一小滴即可。由于中性樹膠粘性很好，所以不要用移液器或者吸管滴加，用黃色的tip頭（記得要將tip頭尖剪平）稍微一蘸，大概還不成滴的那種量吧，最好滴在你要觀察的目的區(qū)域，但是對(duì)于細(xì)胞懸浮液樣品之類的，就沒有明確的目的區(qū)域了。中性樹膠滴上后，要隨即將蓋片蓋上（切記蓋片要很干凈哦，否則到時(shí)會(huì)前功盡棄的），否則中性樹膠中的二甲苯很容易揮發(fā)，一會(huì)就變得很干稠了。

4. 最后，再次提醒，蓋片蓋上后，千萬不要用鑷子等去壓蓋片，否則后果不堪設(shè)想，中性膠會(huì)在蓋片的重力下慢慢的均勻的沿組織片周圍鋪散開來。