間充質(zhì)干細(xì)胞存在于人體的許多器官和組織中，它們具有再生和分化潛能，在修復(fù)體內(nèi)受損組織方面起著重要作用，成體間充質(zhì)干細(xì)胞已在骨髓、脂肪、血液、腸道、皮膚、 肌肉、臍帶等組織中被鑒定，其存在著數(shù)量有限、分離涉及侵入性、誘發(fā)供體部位疾病、捐助者異質(zhì)性等缺點(diǎn)，這些問題使得研究者對(duì)圍產(chǎn)期干細(xì)胞的研究產(chǎn)生了興趣，看看臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞怎么提取吧

1、取健康、自然順產(chǎn)的胎兒臍帶首先剪為3cm的片段，然后用PBS清洗數(shù)次洗掉殘留血液，去除兩條動(dòng)脈和一條靜脈，剪碎至Imm3左右的小塊。

2、加入PBS清洗，800rmp離心5分鐘去除上清，重復(fù)清洗兩遍。

3、加入20ml I型膠原酶消化2h，消化過程中間斷混勻組織塊以促進(jìn)消化。

4、消化完成后800rmp離心5min去除上清,加入PBS清洗,800rmp離心5min清洗兩遍。

5、消化后的組織塊移到3瓶含5ml培養(yǎng)基的25ml培養(yǎng)瓶中放入培養(yǎng)箱37 ℃，5%C02條件下培養(yǎng)。

6、培養(yǎng)瓶前3天不要移動(dòng)以使組織塊貼壁，第4天半量換液，第7天全量換液，

第十二天細(xì)胞生長(zhǎng)如下：

待整體匯合度到80%以上時(shí)，1：3傳代 ，部分細(xì)胞傳進(jìn)孔板，進(jìn)行免疫熒光檢測(cè),如下圖:

   CD-90免疫熒光檢測(cè)

 CD-29免疫熒光檢測(cè)

Humsc細(xì)胞一般在P1代進(jìn)行免疫熒光鑒定，P2代可進(jìn)行凍存，使用MSCM低血清干細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞可達(dá)15倍增以上，MSCM培養(yǎng)基生長(zhǎng)因子含有促干細(xì)胞生長(zhǎng)組分以及抑制雜細(xì)胞生長(zhǎng)的小分子化合物，使用MSCM培養(yǎng)基分離細(xì)胞時(shí)，血清需要提高到10%.

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