在哺乳動物細胞研究中，常常要做細胞的免疫熒光染色，啟達生物為你整理了細胞免疫熒光爬片的操作步驟，點贊收藏，下次實驗就不至于手忙腳亂了。

DAY 1：

　　1.將蓋玻片用洗潔劑清洗干凈，然后用自來水將洗潔劑沖干凈，再用純水沖洗三遍，泡在75%的酒精中靜置10min。

　　2.用鑷子夾起24mm*24mm蓋玻片在酒精燈上將酒精燒干，溫度不可太高。

　　3.將燒干的蓋玻片放在六孔板中，待冷卻后將細胞懸液（約1-2×104個細胞）滴加在蓋玻片上。

4.5h后輕輕補加1ml培養(yǎng)基，置37℃ 5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，細胞貼在玻片上良好生長。

Humsc細胞染色（啟達生物,貨號：CD5007)

　DAY 2：

1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；

5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜；

DAY 3：

6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標本進行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

注意事項：

1 .取細胞爬片時，動作應(yīng)輕柔，防止將細胞爬片夾碎，影響實驗進程。

2.種細胞過程中，要注意將細胞輕柔混勻，“八”字或者“十”字形搖晃，防止細胞局部生長過密。