形膠質細胞（astrocyte）簡稱星形細胞、星狀細胞，統(tǒng)稱星形膠質是存在于腦和脊髓中呈星狀的一種神經膠質細胞，它們執(zhí)行著許多功能，包括對形成血腦屏障的內皮細胞進行生化控制、向神經組織提供營養(yǎng)、維持細胞外離子平衡、調節(jié)腦血流量（CBF），以及在修復腦和脊髓因感染或物理傷害形成的損傷、形成膠質瘢痕的過程中發(fā)揮重要作用。

星形膠質細胞怎么分離，請查閱上海啟達生物給您準備的—鼠源星形膠質細胞的分離步驟:

準備好實驗耗材：

各種槍頭、電動移液槍、移液管、50ML離心管、100微米細胞濾網、培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，濾紙，眼科剪、手術刀片， 離心機，熒光顯微鏡 , AGM星形膠質細胞培養(yǎng)基,GFAP抗體，PBS，L-多聚賴氨酸、青霉素-鏈霉素、0.05%EDTA胰酶。

開始進入主題實驗：

將新生24小時內的大鼠置于冰上，低溫麻醉5分鐘；置于75%酒精中浸泡消毒5分鐘，眼科剪斷頭處死，沿腦部正中由后向前剪開皮膚、皮下組織及顱骨至眉心，眼科鍛向兩側掀開顱骨，完整取出腦組織，置于濾紙上，手術刀片切除小腦及延髓，沿正中切開兩側大腦半球，去除中腦及海馬。刀片撥動大腦皮質，使之在濾紙上滾動一圈，去除腦軟膜，將所取腦皮質組織置于冷的PBS中清洗三次.吸盡液體。

①在1ml不完全培養(yǎng)基中，眼科剪反復剪切皮質組織塊，約50次，使之成為大小約lmm，小塊。

②加入0.05%含EDTA的胰酶15ml,37度消化20分鐘，加入2倍體積不完全培養(yǎng)基終止消化。

③3000r/min渦旋60S,500G離心10分鐘，棄去上清，加入30ml培養(yǎng)基反復吹打使沉淀重懸。

④300G離心10分鐘,棄上清，加入30ml培養(yǎng)基反復吹打，使之重懸。

⑤重復步驟4三次。

⑥經100目細胞濾網過濾后,調整細胞濃度種植于多聚賴氨酸(50ug/ml)包被好的75cm2培養(yǎng)瓶或25cm2培養(yǎng)瓶。

每隔2天全量換液，第二次起每次PBS漂洗兩遍，每次換液水平震蕩培養(yǎng)瓶約50次。

待細胞生長密度至80%以上，進行免疫熒光鑒定，星形膠質細胞一般采用GFAP-FITC免疫熒光結合 DAPI染色進行星形膠質細胞的純度鑒定。

即：星形膠質細胞純度= GFAP陽性細胞數/DAPI陽性細胞數。

小細節(jié)決定實驗成敗，以下點需要多多注意哦：

1、無論分離什么組織，選材注意選取新鮮的組織（不超過24小時)，盡量選取新生三天內的大小鼠。取材過程盡可能保證無菌，盡量剔除腦膜及血管和海馬部分。

2、注意盡可能消除腦組織表面的殘血，避免血細胞及某些血清成分對膠質細胞貼壁的影響。

3、應嚴格掌握好酶的消化濃度和消化時間。

4、嚴格控制膠質細胞培養(yǎng)條件，包括細胞培養(yǎng)用液（培養(yǎng)基，生長因子，血清，抗生素）的質量，濃度，可直接選用啟達生物星形膠質細胞培養(yǎng)基AGM（啟達生物，貨號：P2701），省時省心，成品配制，直接添加即可。

5.包被液多選擇多聚賴氨酸，濃度為25-50ug/ml，因為多聚賴氨酸本身的化學性質，使用過高會導致細胞死亡